Обяснено: Пет стъпки за откриване на коронавирус (COVID-19)
Процесът беше обяснен пред The Indian Express от д-р V Рави, старши професор и ръководител, катедра по невровирусология, NIMHANS.
Д-р V Рави, старши професор и ръководител, катедра по невровирусология, NIMHANS, обяснява процеса на откриване на коронавирус на този уебсайт . Ето петте стъпки:
Събиране и транспортиране
Центърът за тестване взема тампони от носните кухини и задната част на гърлото (фаринкса) и поставя проби в среда за транспортиране на вируси, която съдържа балансирани соли и албумин, за да се предотврати разпадането на вируса. След това пробата се транспортира в хладно съхранение до лабораторията за изпитване.
Екстракция на вирусна РНК
Коронавируси като SARS-CoV (който се появи в Китай през 2002-03 г.), MERS-CoV (който се появи в Саудитска Арабия през 2012 г.) или настоящия SARS-CoV-2, който причини пандемията COVID-19, имат големи , едноверижни РНК геноми. Тестващата лаборатория извлича РНК от пробите, използвайки налични в търговската мрежа комплекти (като тези, направени от компании като QIAGEN.)
Поставяне на РНК в PCR сместа
Извлечената РНК се добавя към смес от полимеразна верижна реакция (PCR). Това включва „основната смес“, която съдържа ензим „обратна транскриптаза“, който превръща РНК в ДНК. Основният микс съдържа Taq полимераза, ензимът, който създава копия на ДНК, нуклеотиди, както и други елементи като магнезий - чийто йон е необходим за усилване на ДНК.
PCR сместа съдържа също „реагенти“ като „праймери“ и „сонди“. Праймерите са специфични вериги на ДНК, които са предназначени да се свързват с ДНК, която трябва да бъде копирана; сондите се използват за откриване на специфичната последователност в ДНК пробата. СЗО препоръча специфични праймери и сонди за тестване за COVID-19.
И накрая, PCR сместа се състои от домакински ген - нормален човешки ген (RNase P), който се използва, за да се гарантира, че пробите са правилно събрани и РНК екстрахирана.
Амплификация на вирусната ДНК
Пробата, в нейната PCR смес, се поставя в епруветки или плочи, които след това се поставят в термоциклираща машина, която се използва за провеждане на PCR процеса.
Първо, РНК се превръща в ДНК. След това започва процесът на копиране на гените. Термичният циклер загрява и охлажда сместа с пробата, като се редуват между три температури - за топене на ДНК, за да се разделят двете вериги, за праймерът да се свърже с ДНК и за синтезиране на нова верига - всичко това в рамките на един цикъл, който продължава до минута. Термичният циклер изпълнява 30-40 такива цикъла, за да амплифицира ДНК, за да провери за вируса.
Тестване срещу контроли
Амплифицираната ДНК се тества срещу положителна контрола, която обикновено се състои от гени на вируса, клонирани в плазмид, и отрицателна контрола, която е „известна“ проба, която е била отрицателна за вируса по-рано.
РНКаза P трябва да показва усилване, положителната контрола трябва да е положителна, отрицателната контрола трябва да е отрицателна и тогава какъвто и резултат да получите за пробата, е правилният резултат, каза невровирусологът д-р V Рави. За да е валиден тестът, преди да бъде публикуван резултатът, трябва да бъдат изпълнени определени „критерии за валидност“.
Не пропускайте от Explained | Как работи тестът за COVID-19
Ако домакинският ген (RNase P) е положителен, положителната контрола е положителна, отрицателната контрола е отрицателна и пробата не показва никакъв PCR положителен резултат, пробата се обявява за отрицателна за РНК на вируса SARS-CoV-2. Ако PCR резултатът е положителен, пациентът има COVID-19.
Споделете С Приятелите Си: